Abstracto
Para algunas de las vacunas contra la COVID-19, las sustancias farmacológicas lanzadas al mercado se fabricaron de forma diferente a las utilizadas en los ensayos clínicos. La fabricación de ARNm modificado con nucleósidos (modRNA) para las vacunas comerciales contra la COVID-19 se basa en la transcripción por ARN polimerasa de una plantilla de ADN plasmídico. Estudios previos identificaron altos niveles de ADN plasmídico en viales de vacunas de modRNA, lo que sugiere que la eliminación de la plantilla de ADN residual es problemática. Por lo tanto, cuantificamos la carga de ADN en un número limitado de viales de vacunas de modRNA contra la COVID-19 de Pfizer-BioNTech y Moderna utilizando dos métodos independientes. El ADN total y los objetivos de ADN específicos se cuantificaron mediante fluorometría Qubit y reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR), respectivamente, en 32 viales que representan 16 lotes de vacunas únicos. Se utilizó el tratamiento con ARNasa A para evaluar el impacto de la diafonía de ARN en la fluorometría de ADN. También se realizó una evaluación preliminar de la longitud del fragmento de ADN y la sensibilidad a la ADNasa I. El ADN total varió de 371 a 1548 ng/dosis y de 1130 a 6280 ng/dosis en los productos de Pfizer y Moderna, respectivamente. El ADN específico de múltiples dianas de ADN plasmídico varió de 0,22 a 7,28 ng/dosis para Pfizer y de 0,01 a 0,78 ng/dosis para Moderna. El promotor-potenciador ori de SV40 (0,25 a 23,72 ng/dosis) solo se detectó en viales de Pfizer. La secuenciación Oxford Nanopore de un vial encontró longitudes media y máxima de fragmentos de ADN de 214 pb y 3,5 kb, respectivamente. Estos datos demuestran la presencia de 1,23 × 10 8 a 1,60 × 10 11 fragmentos de ADN plasmídico por dosis encapsulados en nanopartículas lipídicas. Usando fluorometría, el ADN total en todos los viales probados excedió el límite regulatorio para el ADN residual establecido por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA) y la Autorización Sanitaria Mundial (OMS) en 36-153 veces para Pfizer y 112-627 veces para Moderna después de tener en cuenta la unión no específica a modRNA. Cuando se probó por qPCR, todos los viales de Moderna estaban dentro del límite regulatorio, pero 2/6 lotes de Pfizer (3 viales) excedieron el límite regulatorio para el promotor-enhancer- ori de SV40 en 2 veces. La presencia del elemento promotor-enhancer de SV40 en viales de Pfizer plantea importantes preocupaciones de seguridad. Este estudio enfatiza la importancia de las consideraciones metodológicas al cuantificar el ADN plasmídico residual en productos de modRNA, considerando el aumento de la eficiencia de transfección de LNP, y la dosificación acumulativa presenta riesgos significativos y no cuantificados para la salud humana.
Fuente:
Speicher, D. J., Rose, J., & McKernan, K. (2025). Quantification of residual plasmid DNA and SV40 promoter-enhancer sequences in Pfizer/BioNTech and Moderna modRNA COVID-19 vaccines from Ontario, Canada. Autoimmunity, 58(1). https://doi.org/10.1080/08916934.2025.2551517