Por ANANDAMIDE
Una de las razones por las que creemos que la ADNasaI no logra digerir completamente el ADN en las vacunas de ARNmod es porque la reacción IVT que produce ARNmod a partir de plantillas de ADNds (plásmidos) crea moléculas que son híbridos de ADN:ARN.
Este tiene ADN en una cadena y ARN en la otra. La ADNasaI no reconoce estas moléculas y cuando se tiene un gran exceso de ARN que es complementario a una plantilla de ADN, el ADN se emparejará con el ARN en lugar de con su cadena de ADN complementario, que se encuentra en una cantidad mucho menor que el ARN.
Cubrimos esto en una subpila anterior, pero hasta ahora todo era hipotético.
Híbridos ADN-ARN, R-Loops y resistencia a nucleasas de las vacunas de ARNm
Uno de los caballos de batalla de la genómica es una enzima conocida como RNaseH, que significa RNase Hybrids. Esta es una enzima comúnmente utilizada para crear bibliotecas de ADNc, ya que borrará el ARN una vez que se sintetice el ADNc a partir de una polimerasa RT.
Dado que con frecuencia creamos bibliotecas de RNA-Seq para secuenciar el cannabis infectado con viroide Hop Latent, teníamos algo de esta enzima en el congelador y simplemente la apliqué al ARNm de la vacuna mientras exploraba su impacto en el ARN HpLVd puramente circular (Viroide Hop Latent).
En este experimento utilizamos un tinte específico de ssRNA conocido como AccuBlue de Biotium. Este es un tinte similar al RiboGreen de Invitrogen. Podemos ver 108-120 ng/ul de ARN en las vacunas antes de un tratamiento de 10 minutos con 2ul de esta enzima. Una vez tratada, la señal de ARN cae ~50%.
Cuando esta enzima se utiliza en ARN circular puro (HLVD) y los estándares de ARN del kit de cuantificación AccuBlue, no vemos ningún cambio material en la cantidad de ARN presente. Esto implica que gran parte del ARN de las vacunas es, de hecho, híbridos de ADN-ARN, que son resistentes a la digestión con ADNasaI.
Esto probablemente explica por qué muchos de los lotes de Moderna tienen cantidades muy diferentes de contaminación por ADN Spike en comparación con el ADN Vector. Esto se ve en la Figura 5 de Speicher et al, donde las líneas rojas en muchos lotes de Moderna tienen muchos órdenes de magnitud más de ADN Spike (rojo) en comparación con ADN vectorial (azul), según lo evaluado por qPCR. Sus condiciones de ADNasaI están haciendo un mejor trabajo al eliminar el ADN que no tiene complemento de ARN. No todos los lotes de Moderna muestran este comportamiento y ninguno de los lotes de Pfizer lo muestra.
Hay algunas ADNasas en el mercado que afirman hacer un mejor trabajo al digerir el ADN en híbridos ADN:ARN.
Uno se conoce como DNaseI-XT de NEB.
Es posible que Moderna y Pfizer estén usando ADNasas diferentes en un intento de hacer un mejor trabajo eliminando la contaminación del ADN y es por eso que vemos diferencias en la contaminación del ADN Spike/Vector en algunos lotes.
Conclusiones
No solo hay contaminación por ADNds que excede los límites de la EMA y la FDA en las vacunas de ARNmod, sino que ahora sabemos que hay contaminación por ARNds e híbridos de ARN-ADN. Lo que sucede cuando esta sopa de contaminantes se transfecta a una célula es una incógnita.
Ya sabemos por el artículo de Kwon que las transfecciones de ADN citosólico pueden desencadenar cGAS-STING y conducir a la oncogénesis.
Las transfecciones de ARNbc desencadenarán la vía de ARNi.
Las transfecciones de híbridos de ADN:ARN están menos estudiadas.
Agregue la complejidad del modRNA N1-metil-Pseudo U y todos los cambios de marco que induce, y tenemos una ginebra de baño real disfrazada de medicina de precisión.
Este artículo fue publicado originariamente por https://anandamide.substack.com/ Lea el original.