Evaluación basada en evidencia de diagnósticos por PCR para SARS-CoV-2 y las variantes ómicron mediante secuenciación de Sanger, el estándar de oro

Abstracto


Tanto el SARS-CoV-2 como el SARS-CoV-1 aparecieron inicialmente en China y se propagaron a otras partes del mundo. El SARS-CoV-2 ha generado una pandemia de COVID-19 que ha causado más de 6 millones de muertes humanas en todo el mundo, mientras que el brote de SARS terminó rápidamente en seis meses con un total global de 774 muertes reportadas. Uno de los factores que contribuyen a esta sorprendente diferencia en el resultado entre estos dos brotes es la inexactitud de las pruebas RT-qPCR para el SARS-CoV-2, que generó una gran cantidad de resultados de pruebas falsos negativos y falsos positivos que han engañado a la gestión de pacientes y a los responsables de las políticas de salud pública. Este artículo presenta evidencia de secuenciación de Sanger para demostrar que el protocolo de diagnóstico RT-PCR establecido en 2003 para el SARS-CoV-1 puede, de hecho, detectar el SARS-CoV-2 con precisión debido a la conocida capacidad de la PCR para amplificar secuencias homólogas similares. El uso de RT-PCR anidada seguida de secuenciación de Sanger para reanalizarse 50 muestras de pacientes, recolectadas en enero de 2022 y comercializadas como referencia positiva de RT-qPCR, confirmó que 21 (42%) dieron falsos positivos. La secuenciación rutinaria de los amplicones de RT-PCR del dominio de unión al receptor (RBD) y del dominio N-terminal (NTD) del gen de la proteína Spike (S) es una herramienta para evitar falsos positivos y estudiar los efectos de las mutaciones de aminoácidos y los polimorfismos de un solo nucleótido (SNP) multialélicos en las variantes circulantes, con el fin de investigar su impacto en la eficacia de las vacunas, la terapéutica y el diagnóstico.

Fuente

Evidence-Based Evaluation of PCR Diagnostics for SARS-CoV-2 and the Omicron Variants by Gold Standard Sanger Sequencing – Science, Public Health Policy and the Law
https://publichealthpolicyjournal.com/evidence-based-evaluation-of-pcr-diagnostics-for-sars-cov-2-and-the-omicron-variants-by-gold-standard-sanger-sequencing/