Por Hiroshi Arakawa
Desde que el Dr. Kevin McKernan informó sobre la contaminación del ADN en las vacunas contra el coronavirus en febrero de 2023, han llegado resultados de pruebas de seguimiento de contaminación del ADN de todo el mundo.
En una serie de experimentos para verificar la contaminación del ADN, el Dr. McKernan también realizó experimentos en viales de la vacuna japonesa contra el coronavirus y publicó un artículo que incluía los resultados en su blog en noviembre de 2023. Esta vez me gustaría presentar los contenidos.
Oxford Nanopore ONT es una tecnología de secuenciación profunda de próxima generación que puede analizar directamente secuencias de ADN de cadena larga sin fragmentación del ADN ni amplificación por PCR. Si queda ARN al crear una biblioteca de secuenciación de ADN, se producirán híbridos de ADN/ARN, lo que inhibirá la reacción de secuenciación.
La Figura 1 muestra los resultados de la secuenciación de nanoporos realizada por el Dr. Phillip Buckhaults. Puede ver que hay mucho menos ADN de pico que ADN de vector. Se cree que esto se debe a la gran cantidad de ARN espiga que interfiere con la secuenciación.
Las mediciones del fluorómetro se basan en tintes que no emiten fluorescencia hasta que se unen al ADN o al ARN. Cuando se une a ácidos nucleicos, la fluorescencia aumenta hasta 1000 veces. El kit Qubit dsDNA utiliza pico verde como tinte fluorescente. Este tinte emite luz cuando se une a la doble hélice (surco menor) del ADN bicatenario.
En el experimento que se muestra en la Figura 2, se añaden diferentes cantidades de ARN al ADN y el ADN y el ARN se cuantifican utilizando un fluorómetro y un espectrofotómetro Qubit. Con el kit Qubit ds DNA, el valor de cuantificación de ADN sigue siendo casi el mismo incluso cuando se añade 10 veces la cantidad de ARN. Por otra parte, un espectrofotómetro no puede distinguir entre ADN y ARN, por lo que el valor aumenta a medida que se añade ARN.
Por tanto, el pico verde utilizado en el kit Qubit ds DNA es muy específico para el ADN bicatenario. Sin embargo, no significa que no se una en absoluto al ARN, por lo que si, por ejemplo, hay 100 veces más ARN que ADN, hay que considerar la interferencia del ARN.
En el experimento que se muestra en la Figura 3, el ADN se cuantificó utilizando AccuGreen después de eliminar el ARN de la vacuna contra el coronavirus FL0007 de Pfizer, que se sabe que tiene muchos eventos adversos. Al igual que el verde pico, este tinte también se une al ADN bicatenario.
La digestión térmica del ARN (tratamiento a 55°C durante 120 minutos) no afectó los valores cuantitativos. El tratamiento con RNasa, por otro lado, fue eficaz: la adición de 50-100 μg de RNaseA a 10 μl de ARN degradado de la vacuna en 1 minuto. Cuando se eliminó el ARN con RNaseA, la señal de ADN de Qubit disminuyó. A pesar de esto, la cantidad de ADN supera el estándar de 10 ng/dosis en más de 10 veces.
Existen grandes diferencias en la incidencia de eventos adversos según el lote de vacunas contra el coronavirus. “EX3617” es bien conocido como el número de lote con muchas víctimas por eventos adversos, pero existen otros lotes con muchos eventos adversos, uno de los cuales es “FL0007”. Y este “FL0007” tiene una gran cantidad de ADN contaminado.
Al analizar y cuantificar el ADN contaminado de la vacuna contra el coronavirus, el LNP y el ARN pseudouridinado provocan un efecto inhibidor. Por lo tanto, en el experimento que se muestra en la Figura 5, el Dr. McKernan separó estos dos componentes y luego los midió usando un fluorómetro. El punto importante aquí es que las muestras de este experimento incluyen la vacuna contra el coronavirus de Pfizer que fue inoculada en “Japón”.
Cuando la vacuna monovalente de Pfizer y los dos tipos de vacunas Pfizer Cominati de Japón fueron tratadas con un surfactante (TritonX), la señal se duplicó. Esto puede deberse a que el LNP se descompone, permitiendo que el tinte fluorescente acceda al ADN. Luego, cuando se trató con RNaseA, la señal de AccuGreen disminuyó en un orden de magnitud. Sin embargo, el ADN restante osciló entre 17,5 y 61,8 ng/dosis.
Aunque la señal disminuye con el tratamiento con ADNasaI, la concentración de ADN no cae por debajo de cierto valor incluso si se repite el tratamiento. El profesor McKernan también probó el ADN que no estaba envuelto en LNP, pero cuando lo cuantificó usando un tinte fluorescente, no fue posible degradarlo por debajo de cierto valor, incluso después de tratamientos repetidos con ADNasaI.
La Figura 6 es un experimento que compara la cantidad de ADN contaminado entre FL0007 y dos vacunas japonesas contra el coronavirus de Pfizer utilizando qPCR. qPCR amplifica Ori (vector), pico y potenciador SV40 (verde = Ori, azul = Spike, naranja = potenciador SV40).
FL0007 originalmente tenía una gran cantidad de ADN contaminado y es uno de los lotes de alta concentración que contiene cientos de miles de millones de fragmentos de ADN por dosis. Por otro lado, la cantidad de ADN en la vacuna japonesa contra el coronavirus es aproximadamente 5 ciclos (unas 30 veces) menor que la FL0007. De esta forma, se ha revelado que la vacuna japonesa contra el coronavirus también tiene un alto nivel de contaminación del ADN.
Esta vez aprendí algo del experimento del profesor McKernan. Con el kit Qubit dsDNA, la interferencia del ARN con el ADN es limitada, pero en el análisis de las vacunas contra el coronavirus, el tratamiento con RNasa reduce el valor cuantitativo del ADN en un orden de magnitud. Esta disminución es grande considerando la especificidad del kit Qubit dsDNA como se muestra en la Figura 2, y significa que algo está reaccionando a AccuGreen y elevando el valor medido por el fluorómetro. Es posible que esto se deba simplemente a la cantidad extremadamente grande de ARN, pero no creo que sea la única razón.
Ahora, de aquí en adelante, es mi propia opinión. El ARN de la vacuna contra el coronavirus se diferencia del ARN de las células en que tiene una alta tasa de GC y está modificado por pseudouridina. Tanto la “alta tasa de GC” como la “pseudouridilación” aumentan la fuerza de unión con secuencias complementarias, lo que hace que el ARN de la vacuna contra el coronavirus sea extremadamente “Pegajoso”. Originalmente, hay cuatro tipos de bases que forman el ARN: A, C, G y U, pero si hay demasiadas GC, la secuencia se vuelve monótona y aparecen secuencias similares en todas partes. Entre ellos también se producen secuencias complementarias cortas, que se combinan entre sí para formar dúplex. El ADN genómico suele tener una estructura bicatenaria, pero en general se pueden formar estructuras bicatenarias entre ARN o entre ARN y ADN siempre que las secuencias sean complementarias.
El ARN de la vacuna Corona es particularmente pegajoso para el ADN contaminado. Esto se debe a que el ADN contaminado se deriva originalmente de la plantilla de ARN y cualquier fragmento del ADN contaminado es complementario a la vacuna contra el coronavirus. Cuando el ADN contaminado se combina con el ARN, forma un híbrido ADN/ARN. Un híbrido típico de ARN/ADN es un triplex, con el ADN monocatenario expuesto. Sin embargo, el ADN monocatenario expuesto no está simplemente “desnudo”. Debido a la omnipresente corta complementariedad, se forman varios híbridos de ARN/ADN, tanto grandes como pequeños, e incluso dentro de las moléculas de ARN se pueden formar estructuras bicatenarias. De esta manera, el ARN de la vacuna contra el coronavirus está estrechamente entrelazado con el ADN contaminante y también se cree que está entrelazado dentro de la molécula. En lugar de decir que el ARN pseudouridinado interfiere directamente con las mediciones de fluorescencia, es probable que la compleja estructura de orden superior creada por el ARN esté actuando indirectamente.
Las estructuras de orden superior del ARN y el ADN plantean varios problemas. Si el ARN de la vacuna contra el coronavirus forma un híbrido con el ADN molde, el ADN molde estará protegido y el ADN protegido contaminará la vacuna contra el coronavirus. Además, la fuerte unión al ARN inhibe la eliminación del ADN durante la purificación del ARN de la vacuna. También pueden ocurrir eventos similares dentro de las células. Los híbridos de ARN/ADN pueden prevenir la degradación del ADN, proteger el ADN dentro de las células y aumentar las posibilidades de que el ADN acceda al genoma.
Otra estructura de orden superior que se ha especulado como mecanismo de acción de las vacunas contra el coronavirus es el G4. El ADN genómico es bicatenario, pero las secuencias de ADN ricas en GC pueden tener una estructura de cuatro hebras, denominada cuádruplex de guanina (G4). El ARN también puede adoptar una estructura G4 y se ha señalado que el ARN con una estructura G4 puede acelerar la agregación de priones. De hecho, La enfermedad priónica acelerada en personas que han recibido la vacuna corona se ha convertido en un problema. Esta enfermedad progresa mucho más rápidamente desde el inicio que las enfermedades priónicas convencionales y puede denominarse “enfermedad turbopriónica”.
Como se menciona en el artículo del profesor McKernan, incluso después de repetidos tratamientos con ADNasa, el ADN no pudo degradarse por debajo de un cierto nivel. Además, incluso si el ADN se degrada, inevitablemente quedarán pequeños fragmentos de ADN. Lo realmente importante en el problema del ADN contaminado no es la “masa” sino el “número de moléculas”. Así, esos innumerables fragmentos de ADN contaminante, protegidos por ARN pseudouridinado, “bombardearán” el genoma como una escopeta. En otras palabras, para las preparaciones de ARN que utilizan ADN como plantilla para producir ARN, la contaminación del ADN es inevitable y puede considerarse un defecto fatal.
De hecho, todavía se están explorando métodos para cuantificar el ADN contaminado. Los métodos cuantitativos como qPCR, fluorómetro y electroforesis digital, así como métodos de análisis de secuencia de bases como la secuenciación de Sanger y la secuenciación profunda, tienen cada uno sus propias fortalezas y debilidades. Cuantificar incluso materiales comúnmente estudiados como el ADN es muy difícil, y mucho menos otros componentes. Originalmente, el análisis de componentes en biología y química no es una tecnología que pueda detectar instantáneamente ninguna sustancia. Aunque una determinada sustancia pueda detectarse según cada método de medición, otras sustancias básicamente no están cubiertas. A menos que las empresas farmacéuticas revelen todo el contenido, todavía no sabemos qué contienen realmente estas vacunas contra el coronavirus y los nuevos fármacos LNP/ARN.
El mecanismo de acción más importante para el daño inducido por fármacos debido a la contaminación del ADN es el reordenamiento del genoma, y la primera preocupación es que el número de pacientes con cáncer aumentará y el cáncer se volverá más maligno. Creo que es imprudente esperar que las preparaciones de LNP/ARNm curen el cáncer , y que las preparaciones de LNP/ARNm son en realidad “preparaciones que causan cáncer”.
De hecho, ahora es seguro que las vacunas contra el coronavirus que ya se han inoculado a personas de todo el mundo tienen una gran contaminación del ADN, y ha quedado claro que Japón no es una excepción. Y la contaminación del ADN será un peligro común, no sólo para las vacunas contra el coronavirus, sino también para futuras preparaciones de LNP/ARNm. E incluso ahora, el movimiento japonés contra las vacunas contra el coronavirus sigue ignorando la cuestión de la contaminación del ADN. Si el pueblo japonés supiera que las vacunas contra el coronavirus que se les han inoculado están igualmente contaminadas con ADN, probablemente actuaría como un elemento disuasorio contra las vacunas contra el coronavirus y las futuras vacunas de ARNm.
Este artículo fue publicado originariamente por https://note.com/hiroshi_arakawa. Lea el original.